熒光顯微鏡觀察細胞熒光染色
www.yingshitiantang.com
一、熒光顯微鏡的成像原理
熒光顯微鏡是一種較為常用的的
光學顯微鏡，其基本原理是利用一定波長的激發光對樣品進行激發，使之產生一定波長的熒光，從而用于對樣品結構或其組分進行定性、定位、定量觀察檢測。
什么是熒光?
物質中的電子吸收光的能量由低能狀態轉變為高能狀態，再回到低能狀態時釋放出的光。
即：物質吸收短波光，發射出的長波光。
熒光的性質
保持固有的熒光特性
熒光波長＞激發波長
熒光強度極小于激發光的強度
有不同程度的衰減
熒光強度取決于激發光強度、被檢物濃度、熒光效率
熒光顯微鏡的優點和用途（生物秀儀器頻道www.bbioo.com）
優點：
檢出能力高
對細胞的刺激小
能進行多重染色
用途：
物體構造的觀察
熒光的有無、色調比較進行物質判別
發熒光量的測定對物質定性、定量分析
實驗目的與教學要求
1.掌握熒光顯微鏡的成像基本原理及其使用；
熒光素的特性
熒光顯微鏡技術在生命科學研究中的應用
1.對細胞結構或組分的定性、定位、半定量研究。
2.作為生物大分子篩選與鑒定的標記物。
通過特殊的暗視野聚光器，使照明光線改變途徑，不直接進入物鏡，而是傾斜地照射到樣品上，由樣品表面的繞射光線入射到物鏡內，產生樣品的衍射圖象。
三、試劑與器材
青蛙、洋蔥、人正常肝組織切片和脂肪肝組織切片（HE染色）
甲醇、1‰丫啶橙、濾紙、吸管、載玻片
熒光顯微鏡、暗視野顯微鏡、普通光學顯微鏡
四、實驗內容和實驗步驟
1.蛙血細胞染色觀察：取少許蛙血→常規血涂片→涼干→甲醇固定10min→1‰丫啶橙染色5min→水洗→
室溫
干燥（濾紙擦干玻片底面）→熒光顯微鏡觀察（先低倍后高倍觀察）（可在同一玻片上觀察未熒光染色的血細胞）
2.取洋蔥→撕取一小片內表皮→平面單層鋪展于玻片上→室溫涼干→1‰丫啶橙染色5min→水洗（用吸管，小心掉片）→室溫干燥（或用濾紙擦干）
→熒光顯微鏡觀察
3.暗視野顯微鏡觀察蛙血細胞（示范）
4.觀察人正常肝組織切片和脂肪肝組織切片（HE染色）
五、注意事項
使用熒光顯微鏡時要注意不要直接觀察激發光源，保護眼睛。
暗視野顯微鏡要在光線盡量暗的環境下觀察。
