細(xì)菌數(shù)量的測(cè)定方法

1、計(jì)數(shù)器測(cè)定法

即用血細(xì)胞計(jì)數(shù)器進(jìn)行計(jì)數(shù)。取一定體積的樣品細(xì)胞懸液置于血細(xì)胞計(jì)數(shù)器的計(jì)數(shù)室內(nèi)，用顯微鏡觀察計(jì)數(shù)。由于計(jì)數(shù)室的容積是一定的（0.1mm³），因而根據(jù)計(jì)數(shù)器刻度內(nèi)的細(xì)菌數(shù)，可計(jì)算樣品中的含菌數(shù)。本法簡(jiǎn)便易行，可立即得出結(jié)果。本法不僅適于細(xì)菌計(jì)數(shù)，也適用于酵母菌及霉菌孢子計(jì)數(shù)。

2、電子計(jì)數(shù)器計(jì)數(shù)法

電子計(jì)數(shù)器的工作原理是測(cè)定小孔中液體的電阻變化，小孔僅能通過一個(gè)細(xì)胞，當(dāng)一個(gè)細(xì)胞通過這個(gè)小孔時(shí)，電阻明顯增加，形成一個(gè)脈沖，自動(dòng)記錄在電子記錄裝置上。該法測(cè)定結(jié)果較準(zhǔn)確，但它只識(shí)別顆粒大小，而不能區(qū)分是否為細(xì)菌。因此，要求菌懸液中不含任何碎片。

3、活細(xì)胞計(jì)數(shù)法

常用的有平板菌落計(jì)數(shù)法，是根據(jù)每個(gè)活的細(xì)菌能長(zhǎng)出一個(gè)菌落的原理設(shè)計(jì)的。取一定容量的菌懸液，作一系列的倍比稀釋，然后將定量的稀釋液進(jìn)行平板培養(yǎng)，根據(jù)培養(yǎng)出的菌落數(shù)，可算出培養(yǎng)物中的活菌數(shù)。此法靈敏度高，是一種檢測(cè)污染活菌數(shù)的方法，也是目前上許多國家所采用的方法。

使用該法應(yīng)注意：

①一般選取菌落數(shù)在30～300之間的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)，過多或過少均不準(zhǔn)確；
　　②為了防止菌落蔓延，影響計(jì)數(shù)，可在培養(yǎng)基中加入0.001%一氯化三苯基四氮唑（TTC）；
　　③本法限用于形成菌落的微生物。

廣泛應(yīng)用于水、牛奶、食物、藥品等各種材料的細(xì)菌檢驗(yàn)，是zui常用的活菌計(jì)數(shù)法。

4、比濁法

比濁法是根據(jù)菌懸液的透光量間接地測(cè)定細(xì)菌的數(shù)量。細(xì)菌懸浮液的濃度在一定范圍內(nèi)與透光度成反比，與光密度成正比，所以，可用光電比色計(jì)測(cè)定菌液，用光密度（OD值）表示樣品菌液濃度。此法簡(jiǎn)便快捷，但只能檢測(cè)含有大量細(xì)菌的懸浮液，得出相對(duì)的細(xì)菌數(shù)目，對(duì)顏色太深的樣品，不能用此法測(cè)定。

5、測(cè)定細(xì)胞重量法

此法分為濕重法和干重法。濕重法系單位體積培養(yǎng)物經(jīng)離心后將濕菌體進(jìn)行稱重；干重法系單位體積培養(yǎng)物經(jīng)離心后，以清水洗凈放人干燥器加熱烘干，使之失去水分然后稱重。此法適于菌體濃度較高的樣品，是測(cè)定絲狀真菌生長(zhǎng)量的一種常用方法。

6、測(cè)定細(xì)胞總氮量或總碳量

氮、碳是細(xì)胞的主要成分，含量較穩(wěn)定，測(cè)定氮、碳的含量可以推知細(xì)胞的質(zhì)量。此法適于細(xì)胞濃度較高的樣品。

7、顏色改變單位法（colour change unit,簡(jiǎn)稱CCU）

這種方法通常用于很小，用一般的比濁法無法計(jì)數(shù)的微生物，比如支原體等，因?yàn)橹гw的液體培養(yǎng)物是*透明的，呈現(xiàn)為清亮透明紅色，因此無法用比濁法來計(jì)數(shù)，由于支原體固體培養(yǎng)很困難，用cfu法也不容易計(jì)數(shù)，因此需要用特殊的計(jì)數(shù)方法，即CCU法。它是以微生物在培養(yǎng)基中的代謝活力為指標(biāo)，來計(jì)數(shù)微生物的相對(duì)含量的，下面以解脲脲原體為例，簡(jiǎn)單介紹其操作：

（1）取12只無菌試管，每一管裝1.8ml解脲脲原體培養(yǎng)基。
　　（2）在*管加入0.2ml待測(cè)解脲脲原體菌液，充分混勻，從中吸取0.2ml加入第二管，依次類推，10倍梯度稀釋，一直到zui末一管。
　　（3）于37度培養(yǎng)，以培養(yǎng)基顏色改變的zui末一管作為待測(cè)菌液的CCU，也就是支原體的zui大代謝活力，比如第六管出現(xiàn)顏色改變，他的相對(duì)濃度就是10的6次方CCU/ml。

一般來說，比濁法和菌落計(jì)數(shù)法就可以滿足絕大多數(shù)細(xì)菌的計(jì)數(shù)，但是對(duì)支原體這樣比較特殊的微生物，用CCU法比較合適。測(cè)定微生物生長(zhǎng)的方法很多，各種方法均有其優(yōu)缺點(diǎn)，也不是在任何情況下都適用。在微生物學(xué)工作中一般常用的是平皿菌落計(jì)數(shù)法、計(jì)數(shù)器法和比濁法。至于哪種方法比較適合，還得根據(jù)具體條件而定。